Recombinant Proteinase K, Lyophilized Powder

Popis:

Proteináza K (také známá jako Proteáza K, Endopeptidáza K, Peptidáza K nebo Tritirachium Alkaline Phosphatase) (EC 3.4.21.64) je nespecifická, širokospektrální serinová proteáza izolovaná z saprofytické houby Tritirachium album. Není aktivována kovovými ionty, chelatačními činidly (např. EDTA), sulfhydrylovými činidly ani inhibitory trypsinu nebo chymotrypsinu. Enzym je stabilní v širokém rozmezí pH (4–12,5), s optimální aktivitou při pH 6,5–9,5. Aktivitu lze stimulovat přidáním denaturačních činidel, jako je SDS a močovina. Optimální teplota pro aktivitu proteinázy K je 65°C, kde je dvanáctkrát aktivnější než při 25°C. Při teplotách nad 65°C dochází k rychlé denaturaci enzymu.

Suchý, lyofilizovaný prášek je vysoce rozpustný (>50 mg/ml); zásobní roztoky jsou však normálně 20 mg/ml. Proteináza K je zcela bez RNázy a DNázy a má specifickou aktivitu >30 jednotek/mg při 37 °C. Doporučený skladovací pufr je 20 mM Tris-HCl (pH 7,4), 1 mM CaCl2, 50 % glycerol. Proteináza K je stabilní po dobu jednoho roku v tomto skladovacím pufru a doporučené skladování je –20 °C.

Aplikace:
Proteináza K se používá k rychlé inaktivaci endogenních nukleáz, jako jsou RNázy a DNázy, při izolaci RNA nebo DNA z tkání a buněčných linií, například z epitelových buněk děložní sliznice skotu pro extrakci herpesvirové DNA a extrakci virové RNA z nosních výtěrů. Tento enzym může být také použit jako součást fáze lock a přímého PCR lysis pufru pro odstranění nukleáz při přípravě tkáňových řezů pro in situ hybridizaci.

Zdroj:

Saprofytická houba Tritirachium album.

Skladování: 

-20°C

Vyhněte se vícenásobným cyklům zmrazování a rozmrazování.

Skladování při –20°C v nepřítomnosti glycerolu může vést k vysrážení proteinázy K. V roztocích skladovaných při 2°C–8°C po delší dobu může dojít k růstu bakterií. Ca2+ může sloužit jako stabilizátor k potlačení autolýzy.

Definice jednotky:

Jedna jednotka uvolní 1 µmol aminokyselin pozitivních na Folin, měřených jako tyrosin, při 37 °C, pH 7,5, s denaturovaným hovězím hemoglobinem jako substrátem.

Velikost balení:

100 mg (kat.č. PKP-100)

250 mg (kat.č. PKP-200)

1 000 mg (kat.č. PKP-300)

5 000 mg (kat.č. PKP-400)