Tn5 Transposase

Popis: 
Tn5 transpozáza od společnosti MCLAB představuje vysoce aktivní variantu enzymu Tn5 transpozázy. Tento enzym usnadňuje náhodnou inserci Tn5 transpozonu do cílové DNA in vitro. Pro efektivní transpozici je nutná přítomnost specifické 19-bp sekvence rozpoznávající transpozázu (Mosaic End nebo ME sekvence) na každém konci Tn5 transpozonu.

Proces transpozice katalyzovaný Tn5 transpozázou zahrnuje vícekrokový mechanismus „vyjmutí a vložení“ (cut and paste). Nejprve se enzym váže na 19-bp ME sekvenci transpozonu a tvoří komplex známý jako Transpozom. Následně Transpozom zahajuje náhodné útoky na fosfodiesterovou kostru cílové DNA, což vede k jejímu naštěpení. Nakonec Tn5 transpozáza katalyzuje kovalentní vazbu 3′-OH konců transpozonu k exponovaným 5′-fosforylovaným koncům cílové DNA. Tento transpoziční proces vede k vytvoření 9-bp sekvenční duplikace, která bezprostředně lemuje místo inserce transpozonu.

Enzym je dodán o koncetranci 1 U/µL. 

Aplikace:

• Proveďte in vitro transgenní experiment.
• Vytvořte náhodnou knihovnu pro sekvenování druhé generace.
• Zahrňte marker, jako je promotor T7 nebo počátek replikace R6Ky, do jakékoli požadované cílové DNA.
• Integrujte jakoukoli vlastní sekvenci DNA ohraničenou jedním nebo oběma konci 19-bp ME transpozonu Tn5 do vybrané cílové DNA.
• Připravte transpozomy bez Mg2+ pro elektroporaci do živých bakterií, což umožní následné náhodné vložení transpozonu do bakteriálního chromozomu.

Zdroj:

Purifikováno z kmene E. coli nesoucího gen Tn5.

Skladování:

-20°C

Vyhněte se opakovanému volnému rozmrazování.

Součástí balení: 

10X Tn5 transposázový reakční pufr (1 M Tris-acetát (pH 7,5); 3 M octan draselný; 200 mM octan hořečnatý)
10X Tn5 stop roztok (1% S)

Velikost: 

100 µL (kat.č. TN5-100)
500 µL (kat.č. TN5-200)