Cas12a2 Nuclease

Popis:

Cas12a2, typ V CRISPR/Cas nukleáza, štěpí cílovou RNA po rozpoznání cílové RNA komplementární crRNA. Cas12a2 zpracovává své vlastní crRNA. Pro Cas12a2 je požadovaný motiv PFS 5′-GAAAG-3′. Cas12a2 dokáže neselektivně rozkládat jednovláknovou DNA (ssDNA), dvouvláknovou DNA (dsDNA) a jednovláknovou RNA (ssRNA) jako vedlejší aktivitu poté, co detekuje správné navázání RNA řízené crRNA. Tyto vlastnosti umožňují Cas12a2 fungovat jako jednoefektorová nukleáza, která efektivně a citlivě detekuje RNA. SuCas12a2 od Sulfuricurvum sp. PC08-66 je programovatelná nukleáza řízená 42-44 nt crRNA a lze ji použít při detekci RNA a editaci genomu.

Čistota je vyšší než 95 %, jak bylo stanoveno pomocí SDS-PAGE a FPLC.

Aktivita: Pro test štěpení: 20 µl reakce, včetně enzymu SuCas12a2, crRNA, cílové RNA a 1x reakčního pufru, předehřátá na 37 °C po dobu 15 minut. Poté pro test štěpení ssDNA sondou, jak je znázorněno na obr. 1 níže, bylo přidáno 100 nM ssDNA 5'FAM sondy, inkubováno při 37 °C po dobu 30 minut; Pro test štěpení plasmidu, jak je znázorněn na obr. 2 níže, bylo přidáno 7 nM plasmidu pUC19, inkubováno při 37 °C po dobu 25 minut a reakce byla zastavena 1 ul proteinázy K (800 U/ml).

Aplikace:

• detekce RNA
• diagnostika CRISPR
• editace genomu

Zdroj:

Cas12a2 gen ze Sulfuricurvum sp. PC08-66 (SuCas12a2, UniProtKB: A0A0C2W1L1) vyjádřeno v E. coli.

Skaldování:

-20°C

Velikost:

200 pmol, 200 µl (1 µM) (kat.č. Cas12a2-100)

1 nmol, 200 µl (5 µM) (kat.č. Cas12a2-200)

10X Cas12a2 Reaction Buffer 200 µl (kat.č. CAS12A-BUF-100-A2)

10X Cas12a2 Reaction Buffer 1 ml (kat.č. CAS12A-BUF-200-A2)