Cas9 nukleáza

Úvod

Nukleáza Cas9 naváděná RNA sekvencí je enzym, který katalyzuje štěpení dvouvláknové DNA na cílovém místě. Tato nukleáza pochází z bakterie Streptococcus pyogenes, u níž je součástí takzvaného CRISPRu (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) sloužícího jako adaptivní imunitní systém. CRISPR/Cas9 je nástroj pro editaci genomu, který umožňuje specifické narušení a následné nahrazení části sekvence DNA. Nukleáza Cas9 zajistí rozvinutí a rozštěpení dvouvláknové DNA na specifickém místě (pomocí vodící sekvence RNA - sgRNA), což vede ke vzniku dvouvláknového zlomu. Tento zlom je následně opraven procesem nehomologního spojování konců (NHEJ), jež má za následek narušení otevřeného čtecího rámce cílového genu.

Popis

Rekombinantní Cas9-NLS obsahuje celou proteinovou sekvenci Cas9 (1368 aminokyselin) fúzovanou s patentovanou sekvencí nukleární lokalizace (NLS) a 6 X His tag na C-konci. Protein má molekulovou hmotnost 162 kDa (zjištěno metodou SDS-PAGE).

Varianty Cas9 pro různé genomové manipulace jsou k dispozici v 8 formách

Cas9 (WT-wild type)

Cas9 s jaderným lokalizačním signálem (NLS)

Cas9 se 3 NLS (na C-konci) pro lepší lokalizaci jádra

NickaseCas9 (D10A) pro tvorbu niků

dCas9 (D10A/H840A) pro jednoduché vázání

Hi-Fi1 Cas9 3NLS (K848A, K1003A, R1060A) a Hi-Fi2 Cas9 3NLS (N497A, R661A, Q695A, Q926A) pro snížení off-target efektů

dCas9-biotinylovaný pro imunoprecipitaci

Funkce

Nízká hladina endotoxicity

Vysoká biologická aktivita

Konzistentní od šarže k šarži

Aplikace

Úpravy genomu

Zdroj

Gen Cas9 ze Streptococcus pyogenes exprimovaný v E. coli

Čistota

Větší než 97 % (stanoveno pomocí SDS-PAGE).

Aktivita

96 % štěpení produktu PCR po 30 minutách při 37 °C. Reakce obsahuje na celkový objem 20 ul následující složky: 100nM Cas9 protein, 200nM tracrRNA, 200nM EMX1-specific crRNA, 200ng EMX1-specific PCR product and 1x digestion buffer (20mM HEPES, 100mM NaCl and 5mM MgCl2, pH 6.5). Inkubujte 30 minut při 37 °C, následně zastavte reakci přidáním 1µl RNázy A (1mg/ml).

Doporučené podmínky skladování: -20 ° C

10x reakční pufr Cas9
200 mM HEPES, 50 mM MgCl2, 1 M NaCl, 1 mM EDTA, pH 6.5

Pufr na skladování
50 mM Tris-HCl, 50 M KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 50 % glycerol, pH 7.5

Nabídka