Novinky

Martinská genetická konference 2023

V březnu se zúčastníme celoslovenské genetické konference, která se koná 16. - 17. 3. 2022 v hotelu Turiec ve slovenském Martině. Konferenci pořádá Slovenská společnost lékařské genetiky a je již trad...
Více
Genetická konference GSGM a Genetické dny

Navštivte nás na Genetické konferenci pořádané Genetickou společností Gregora Mendela. Tento rok proběhne v termínu 5. - 7. 10. společně s konferencí Genetické dny, jež se konají ve dvouletých interva...
Více
55. výroční cytogenetická konference

Přijďte se na nás podívat na Celostátní sjezd Společnosti lékařské genetiky a genomiky ČLS JEP a 55. výroční cytogenetickou konferenci, jež se koná ve Wellness Hotelu Step 15. a 16. září. Rádi se s Vá...
Více

Zobrazit archiv novinek

https://www.carolinabiosystems.cz/590-thickbox_default/cas9-nukleaza.jpg

View full size

Cas9 nukleáza

Zeptejte se

Kód produktu: CAS9-100

Nukleáza Cas9 naváděná RNA sekvencí katalyzuje štěpení dvouvláknové DNA na cílovém místě.

Více informací

Úvod

Nukleáza Cas9 naváděná RNA sekvencí je enzym, který katalyzuje štěpení dvouvláknové DNA na cílovém místě. Tato nukleáza pochází z bakterie Streptococcus pyogenes, u níž je součástí takzvaného CRISPRu (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) sloužícího jako adaptivní imunitní systém. CRISPR/Cas9 je nástroj pro editaci genomu, který umožňuje specifické narušení a následné nahrazení části sekvence DNA. Nukleáza Cas9 zajistí rozvinutí a rozštěpení dvouvláknové DNA na specifickém místě (pomocí vodící sekvence RNA - sgRNA), což vede ke vzniku dvouvláknového zlomu. Tento zlom je následně opraven procesem nehomologního spojování konců (NHEJ), jež má za následek narušení otevřeného čtecího rámce cílového genu.

Popis

Rekombinantní Cas9-NLS obsahuje celou proteinovou sekvenci Cas9 (1368 aminokyselin) fúzovanou s patentovanou sekvencí nukleární lokalizace (NLS) a 6 X His tag na C-konci. Protein má molekulovou hmotnost 162 kDa (zjištěno metodou SDS-PAGE).

Varianty Cas9 pro různé genomové manipulace jsou k dispozici v 8 formách

Cas9 (WT-wild type)

Cas9 s jaderným lokalizačním signálem (NLS)

Cas9 se 3 NLS (na C-konci) pro lepší lokalizaci jádra

NickaseCas9 (D10A) pro tvorbu niků

dCas9 (D10A/H840A) pro jednoduché vázání

Hi-Fi1 Cas9 3NLS (K848A, K1003A, R1060A) a Hi-Fi2 Cas9 3NLS (N497A, R661A, Q695A, Q926A) pro snížení off-target efektů

dCas9-biotinylovaný pro imunoprecipitaci

Funkce

Nízká hladina endotoxicity

Vysoká biologická aktivita

Konzistentní od šarže k šarži

Aplikace

Úpravy genomu

Zdroj

Gen Cas9 ze Streptococcus pyogenes exprimovaný v E. coli

Čistota

Větší než 97 % (stanoveno pomocí SDS-PAGE).

Aktivita

96 % štěpení produktu PCR po 30 minutách při 37 °C. Reakce obsahuje na celkový objem 20 ul následující složky: 100nM Cas9 protein, 200nM tracrRNA, 200nM EMX1-specific crRNA, 200ng EMX1-specific PCR product and 1x digestion buffer (20mM HEPES, 100mM NaCl and 5mM MgCl2, pH 6.5). Inkubujte 30 minut při 37 °C, následně zastavte reakci přidáním 1µl RNázy A (1mg/ml).

Doporučené podmínky skladování: -20 ° C

10x reakční pufr Cas9
200 mM HEPES, 50 mM MgCl2, 1 M NaCl, 1 mM EDTA, pH 6.5

Pufr na skladování
50 mM Tris-HCl, 50 M KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 50 % glycerol, pH 7.5

Nabídka

Název	Katalogové číslo	Velikost	c
Cas9 nukleáza (wt)	CAS9-100	250 pmol, 50 µl	5 µM
Cas9 nukleáza (wt)	CAS9-200	1 nmol, 50 µl	20 µM
Cas9 nukleáza NLS	CAS9N-100	250 pmol, 50 µl	5 µM
Cas9 nukleáza NLS	CAS9N-200	1 nmol, 50 µl	20 µM
Cas9 nukleáza 3NLS	CAS9N3-100	250 pmol, 50 µl	5 µM
Cas9 nukleáza 3NLS	CAS9N3-200	1 nmol, 50 µl	20 µM
nikáza Cas9 3NLS	nikáza-100	250 pmol, 50 µl	5 µM
nikáza Cas9 3NLS	nikáza-200	1 nmol, 50 µl	20 µM
dCas9 3NLS	dCAS9-100	250 pmol, 50 µl	5 µM
dCas9 3NLS	dCAS9-200	1 nmol, 50 µl	20 µM
Hi-Fi1 Cas9 3NLS (K848A, K1003A, R1060A)	HF1CAS9-100	250 pmol, 50 µl	5 µM
Hi-Fi1 Cas9 3NLS (K848A, K1003A, R1060A)	HF1CAS9-200	1 nmol, 50 µl	20 µM
Hi-Fi2 Cas9 3NLS (N497A, R661A, Q695A, Q926A)	HF2CAS9-100	250 pmol, 50 µl	5 µM
Hi-Fi2 Cas9 3NLS (N497A, R661A, Q695A, Q926A)	HF2CAS9-200	1 nmol, 50 µl	20 µM
dCas9-biotinylovaná 3NLS	dCAS9B-100	250 pmol, 50 µl	5 µM
dCas9-biotinylovaná 3NLS	dCAS9B-200	1 nmol, 50 µl	20 µM