2X MCAmp Library Amplification Master Mix

Popis

Master Mix 2X MCAmp Library Amplification od společnosti MCLAB byl speciálně navržen, aby poskytoval přesnou a zároveň robustní amplifikaci fragmentů NGS knihoven. Tento master mix využívá patentovanou kombinaci ultrarychlých a vysoce přesných DNA polymeráz. Reakční pufr byl optimalizován, aby poskytoval robustní amplifikaci fragmentů i při jejich nízké vstupní koncentraci a sekvenci bohaté na GC nebo AT páry. Výsledkem je vysoká výtěžnost s vysokou spolehlivostí, nízkou PCR duplikací a redukovaným zkreslením, což vytváří větší a rovnoměrnější pokrytí zejména náročných oblastí genomu. Pro platformy Illumina je k dispozici též optimalizovaná sada primerů P5 a P7.

Vlastnosti

Vysoká přesnost - master mix využívá DNA polymerázy s 3'->5' exonukleázovou aktivitou (proof-reading) pro přesné začlenění nukleotidů do finálních produktů

Vysoká účinnost - polymerázy  mají ultra vysokou procesivitu, tudíž je pro amplifikaci potřeba méně cyklů

Nízké zkreslení a PCR duplikace - optimalizace pufru, jejímž výsledkem je větší počet čtení s rovnoměrnějším pokrytím, což pomáhá minimalizovat náklady a ušetřit čas.

Doporučené podmínky skladování: -20 °C

Inaktivace teplem: Ne

Složení jednotky

25 mM TAPS-HCl (pH 9.3 @ 25°C), 50 mM KCl, 2 mM MgCl₂, 1 mM β-mercaptoethanol, 200 μM dNTPs včetně [3H]-dTTP and 400 μg/ml aktivované DNA telecího brzlíku

Definice jednotky

Jedna jednotka je definována jako množství enzymu, které zaručí inkorporaci 10 nmol dNTP do materiálu nerozpustného v kyselině za 30 minut při 74 ° C.

Obrázek: Zásislost přípravy amplifikace knihovny na různém množství vstupní lidské genomové DNA. Příprava knihovny a výběr velikosti fragmentů (~ 350 bp) byly provedeny pomocí kitu Topomize DNA Library Prep od společnosti MCLAB. Všechny amplifikace byly provedeny do 8 cyklů. A. Fotografie agarózového gelu po amplifikaci knihovny a vyčištění ukazující stabilní distribuci fragmentů s různou velikostí. M. 100 bp marker. Řada 1: 100 ng vstupní DNA. Řada 2: 50 ng vstupní DNA. Řada 3: 25 ng vstupní DNA. B. Průměrný výtěžek DNA (korespondující s DNA z obrázku A.) stanovený metodou qPCR za použití kitu MCNexttm SYBR® Fast qPCR Library Quantifiaction od společnosti MCLAB.