Cas12a nukleáza

Popis
Systémy CRISPR-Cas jsou výkonné nástroje pro úpravu nukleových kyselin. Nukleáza Cas12a (také označovaná jako Cpf1), patřící do systému CRISPR druhé třídy typu V je kompaktní a účinný enzym, který štěpí cílovou dvouvláknovou DNA za vzniku fragmentů s lepivými konci. Cas12a zpracovává i svou vlastní zralou crRNA. Sekvence PAM (Motiv sousedící s protospacerem) pro Cas12a je 5'-TTTN. Cas12a je schopna bez rozdílu štěpit jednovláknovou DNA, jakmile detekuje správnou vazbu vodící RNA na DNA. Tato vlastnost umožňuje Cas12a použít jako účinný, rychlý a citlivý nástroj pro detekci DNA kromě jejího původního účelu jako platforma pro úpravy genomu.
LbCas12a z Lachnospiraceae bacterium (kmen ND2006) je programovatelná DNA endonukleáza vedená 42-44nt crRNA a lze ji aplikovat in vitro na štěpení DNA a detekci DNA.
LbCas12a-NLS je fúzován s N- i C-terminálním SV40 (opičí virus 40) velkými T antigeny jaderných lokalizačních signálů (NLS) pro lepší transport do jádra.

Funkce

Nízká endotoxicita
Vysoká biologická aktivita

Aplikace
Úpravy genomu, detekce DNA, diagnostika CRISPR

Zdroj
Gen Cas12a z Lachnospiraceae bacterium (kmen ND2006) exprimovaný v E. coli

Čistota
Větší než 98 % (stanoveno metodou SDS-PAGE)

Aktivita
Po 1 h reakce při 37 °C se štěpí 97% produktu PCR.
Průběh reakce: celkový objem reakce 30 ul, včetně 1 ul enzymu Cas12a (1 uM), 100 ng CRRNA, 50 ng purifikovaného produktu PCR a 1 x reakčního pufru. Inkubuje se 1 h při 37 ° C a reakce se zastaví 1 ul proteinázy K (800 U/ml).

Doporučené podmínky skladování
-20 °C

10 X reakční pufr
500 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, 100 mM MgCl2, 1 mg/ml rekombinantního albuminu, pH 7.9 při 25 °C

Skladovací pufr
500 mM NaCl, 20 mM octan sodný, 0.1 mM EDTA, 0.1 mM TCEP, 50% glycerol, pH 6 při 25 °C