Cartridge s NTA agarózou pro His-tag rekombinantní proteiny

Popis

Nitrilotrioctová kyselina (NTA) nabitá nikelnatými, kobaltovými, měďnatými nebo zinečnatými kationty vázaná dlouhými oddalujícími raménky s agarózou CL-6B nabízí vysokou vazebnou kapacitu s minimální nespecifickou vazbou.

Vlastnosti

Četné kombinace ligandů a kovových iontů
Vysoká afinita a velká kapacita
Minimální nespecifická vazba a vynikající čistota
Dlouhá oddalující raménka a minimální sterické překážky
Nízké uvolňování iontů ze sorbentu a jeho vynikající stabilita
Zaručen vysoký výkon i po opakovaném použití

Aplikace

Čištění His-tag proteinů

Výměna stávající NTA nebo IDA agarózy za novou
Čištění za nativních i denaturačních podmínek
Vhodné pro malé proteiny, velké proteinové komplexy a proteiny s nízkou expresí

Purifikace rekombinantních His-značených proteinů

His-značení (His-tag) nebo polyhistidinová značka je řetězec histidinových zbytků na N- nebo C- konci rekombinantního proteinu. Takový řetězec se skládá ze 4 až 10 zbytků, přičemž 6 zbytků je nejběžnějších a nazývají se termínem polyhistidinová kotva. Rekombinantní proteiny mohou mít více než jednu polyhistidinovou kotvu.

V IMAC (Immobilized metal ion affinity chromatography) jsou kovové ionty imobilizovány na pryskyřičné matrici za použití chelatačního činidla, jako je NTA nebo IDA. Ni2+, Co2+, Cu2+ a Zn2+ jsou nejčastěji používanými ionty pro purifikaci rekombinantních proteinů s his značkou, jelikož k ní mají vysokou afinitu a silně se na IMAC kolonu vážou oproti ostatním proteinům, které se váží slabě nebo vůbec. Použitím his značení a metody IMAC lze tedy získat relativně čistý rekombinantní protein přímo ze surového lyzátu.

Jak pro metodu IMAC vybrat různé ligandy a kovové ionty?

NTA a IDA patří mezi dva nejpoužívanější ligandy. NTA je čtyřmocný ligand a je tedy silnější než trojmocný IDA. Obecně NTA poskytuje vyšší vazebnou specificitu a nižší vmíru uvolňování kovových iontů, zatímco IDA vykazuje méně specifickou vazbu a zvýšené uvolňování kovových iontů. IDA může mít vyšší hustotu nasycení kovových iontů a obvykle vyžaduje mnohem nižší koncentraci imidazolu v eluentu.

U kovových iontů v následujícím pořadí Co2+, Zn2+, Ni2+ a Cu2+ se obecně zvyšuje vazebná afinita, zatímco specificita klesá. Cu²⁺ má nejvyšší afinitu poskytující nejvyšší výtěžnost bílkovin, ale nízkou specificitu. Co²⁺ má nejnižší afinitu, ale nejvyšší specificitu, což snižuje množství proteinových nečistot v eluátu. Ni²⁺ je nejpoužívanější, jelikož poskytuje rovnováhu mezi afinitou a specificitou.

Výběr optimální kombinace ligandu a kovového iontu závisí na mnoha faktorech, proto je nejlepším přístupem vyzkoušet různé kombinace a nechat rozhodnout vaše proteiny. Vysoce výkonné pryskyřice a cartridge FastSep™ nabízejí mnoho kombinací pro různé potřeby čištění.

Vysoce účinné pryskyřice a cartridge FastSep™ jsou založeny na zesítěných 6% kuličkách agarosy, které mají speciální strukturální vlastnosti, jež vedou k vynikajícím průtokovým vlastnostem, nízkému protitlaku a struktuře s otevřenými póry. Díky těmto vlastnostem umožňují provoz při velmi vysokém stupni průtoku, což má za následek zvýšenou propustnost a rychlé čištění kolony mezi chromatografickými cykly.

Nabídka

Specifikace