V březnu se zúčastníme celoslovenské genetické konference, která se koná 16. - 17. 3. 2022 v hotelu Turiec ve slovenském Martině. Konferenci pořádá Slovenská společnost lékařské genetiky a je již trad...
VíceNavštivte nás na Genetické konferenci pořádané Genetickou společností Gregora Mendela. Tento rok proběhne v termínu 5. - 7. 10. společně s konferencí Genetické dny, jež se konají ve dvouletých interva...
VícePřijďte se na nás podívat na Celostátní sjezd Společnosti lékařské genetiky a genomiky ČLS JEP a 55. výroční cytogenetickou konferenci, jež se koná ve Wellness Hotelu Step 15. a 16. září. Rádi se s Vá...
VíceZdroj: Thermus species GW
5’-A C G G A (N)11–3’
3’-T G C C T (N) 9 -5’
Purifikováno z kmene E. coli, který nese klonovaný gen tspGWRI z Thermus sp. GW.
Reakční teplota: 70 °C
Prototyp: TspGWI
Inaktivační teplota: -
Reakční pufr:
1x TspGWI Buffer: 10 mM Tris-HCl (pH 8.5 při 25°C), 1 mM dithiothreitol, 10 mM MgCl2 +enhancers (1).
Vyvarujte se vícenásobných cyklů zmrazování/rozmrazování zásobního reakčního pufru /ne více než 3x/. Rozmrazování by mělo být prováděno při teplotách nepřesahujících 10 °C. Doporučený postup je rozdělit dodaný reakční pufr do alikvót a dlouhodobě uchovávat při –70°C. Teplota –20°C by měla být používána pouze pro krátkodobé skladování.
Poznámky: Před štěpením je nutné DNA purifikovat. Nedoporučujeme používat více než 2 jednotky na 50 μl reakce. Štěpení by mělo probíhat déle než 2 hodiny. Protože se TspGWI váže na DNA velmi pevně, nadměrné množství přidaného TspGWI může zpomalit migraci DNA na gelu, a to i v přítomnosti denaturačních činidel. Restrikční endonukleáza TspGWI je velmi silně stimulována přítomností dvou restrikčních míst v opačné orientaci. Účinnnost štěpení ovliňuje také vzdálenost mezi rozpoznávacími sekvencemi a jejich bezprostřední okolí. Substráty s jedním rouzpoznávacím místem jsou štěpeny pomalu.
Definice jednotky: Jedna jednotka je množství enzymu potřebné k úplnému strávení 1 µg pBR322 DNA za 1 hodinu. Celkový reakční objem je 50 ul.
Podmínky skladování: Skladujte při –20 °C.
Kontrola kvality:
Všechny enzymy jsou testovány na kontaminaci endonukleázou, 3'-exonukleázou, 5'-exonukleázou/5'-fosfatázou a také na nespecifické aktivity jedno- a dvouřetězcové DNázy.
Reference:
1. Żylicz-Stachula, A., Harasimowicz-Slowinska, R. Sobolewski, I. and Skowron, P., (2002). Nucleic Acids Research30, 7 e 33.