TspGWI

Zdroj: Thermus species GW

5’-A C G G A (N)11–3’
3’-T G C C T (N) 9 -5’

Purifikováno z kmene E. coli, který nese klonovaný gen tspGWRI z Thermus sp. GW.

Reakční teplota: 70 °C

Prototyp: TspGWI

Inaktivační teplota: -

Reakční pufr:

1x TspGWI Buffer: 10 mM Tris-HCl (pH 8.5 při 25°C), 1 mM dithiothreitol, 10 mM MgCl2 +enhancers (1).

Vyvarujte se vícenásobných cyklů zmrazování/rozmrazování zásobního reakčního pufru /ne více než 3x/. Rozmrazování by mělo být prováděno při teplotách nepřesahujících 10 °C. Doporučený postup je rozdělit dodaný reakční pufr do alikvót a dlouhodobě uchovávat při –70°C. Teplota –20°C by měla být používána pouze pro krátkodobé skladování.

Poznámky: Před štěpením je nutné DNA purifikovat. Nedoporučujeme používat více než 2 jednotky na 50 μl reakce. Štěpení by mělo probíhat déle než 2 hodiny. Protože se TspGWI váže na DNA velmi pevně, nadměrné množství přidaného TspGWI může zpomalit migraci DNA na gelu, a to i v přítomnosti denaturačních činidel. Restrikční endonukleáza TspGWI je velmi silně stimulována přítomností dvou restrikčních míst v opačné orientaci. Účinnnost štěpení ovliňuje také vzdálenost mezi rozpoznávacími sekvencemi a jejich bezprostřední okolí. Substráty s jedním rouzpoznávacím místem jsou štěpeny pomalu.

Definice jednotky: Jedna jednotka je množství enzymu potřebné k úplnému strávení 1 µg pBR322 DNA za 1 hodinu. Celkový reakční objem je 50 ul.

Podmínky skladování: Skladujte při –20 °C.

Kontrola kvality:

Všechny enzymy jsou testovány na kontaminaci endonukleázou, 3'-exonukleázou, 5'-exonukleázou/5'-fosfatázou a také na nespecifické aktivity jedno- a dvouřetězcové DNázy.

Reference:

1. Żylicz-Stachula, A., Harasimowicz-Slowinska, R. Sobolewski, I. and Skowron, P., (2002). Nucleic Acids Research30, 7 e 33.