SmartRT™ Reverse Transcriptase Kit

Opis

SmartRTTM Reverse Transcriptase to skonstruowana odwrotna transkryptaza MMLV, poprawiająca termostabilność enzymu, redukująca aktywność RNazy H i zdolność syntezy cDNA. Enzym wykazuje również aktywność transferazy końcowej, dodając kilka dodatkowych nukleotydów na koniec zsyntetyzowanego cDNA. W połączeniu z modyfikowanym oligo dT primerem na 3' i uniwersalnym oligo SMART na 5', zawierającym sekwencję komplementarną do kwasów nukleinowych na 3' końcu cDNA pierwszego łańcucha, SmartRTTM reverse transcriptase produkuje gotowe do RACE pełne cDNA o pełnej długości.

Cechy Transkryptaza odwrotna MCLAB to jedna z transkryptaz o najwyższej termostabilności z aktywnością transferazy końcowej.

Źródło E. coli

Zastosowanie Transkrypcja odwrotna i synteza gotowego do RACE cDNA pełnej długości

Dostarczane z 5 x bufor syntezy cDNA pierwszego łańcucha

Zalecane warunki przechowywania -20 °C

Definicja jednostki Jednostka jest zdefiniowana jako ilość enzymu, która w ciągu 10 minut przy 37°C wbuduje 1 nmol dTTP w materiał nierozpuszczalny w kwasie, używając poli(A):oligo(dT) jako matrycy:prymera.

Warunki wysyłki Suchy lód

Protokół użytkownika Dla gotowego do RACE pierwszego łańcucha cDNA Połącz następujące składniki w osobnych probówkach PCR o pojemności 0,2 ml (20 µl reakcji): 1–9 µl próbki RNA 1 µl 5’ SMART Uniwersalny Primer 1 µl primer oligo dT 1 µl dNTP Dodaj wodę destylowaną do objętości końcowej 12 µl dla każdej reakcji. Inkubuj probówki w 65°C przez 5 min. Schłodź probówki na lodzie przez 3 min. Dodaj do każdej probówki reakcyjnej: 4 µl buforu pierwszego łańcucha 5X 1 µl DTT (20 mM) 2 µl mieszaniny dNTP (10 mM) 2 µl SmartRT odwrotnej transkryptazy Inkubuj probówki: 50°C przez 1,5 godz. 85°C przez 5 min.

Dla regularnej syntezy cDNA pierwszego łańcucha

Połącz następujące składniki w osobnych probówkach PCR o pojemności 0,2 ml (20 µl reakcji): 1–10 µl próbki RNA 1 µl primer oligo dT lub primer losowy 1 µl dNTP Dodaj wodę destylowaną do objętości końcowej 12 µl dla każdej reakcji. Inkubuj probówki w 65°C przez 5 min. Schłodź probówki na lodzie przez 3 min. Dodaj do każdej probówki reakcyjnej: 4 µl buforu pierwszego łańcucha 5X 1 µl DTT (20 mM) 2 µl mieszaniny dNTP (10 mM) 2 µl SmartRT odwrotnej transkryptazy Inkubuj probówki: 50°C przez 45 min. 85°C przez 5 min.