Aktualności

Archiwum aktualności
Strona główna>Produkty>Analiza kwasów nukleinowych>PCR>Polimerazy>I-5™ 2X Hi-Fi PCR Master Mix
https://www.carolinabiosystems.cz/288-thickbox_default/i-5-2x-hi-fi-pcr-master-mix.jpg View full size

I-5™ 2X Hi-Fi PCR Master Mix

Kontakt z nami

Opis:
I-5 Hi-Fi DNA HotStart Polimeraza jest ultra-szybką oraz wysokiej specyficzności DNA polimerazą.  Zapewnia solidną amplifikację z różnych matryc łącznie z plazmidami, BACS, genomowym DNA i lambda DNA. Pozwala na amplifikację do 8kb z ludzkiego genomowego DNA i do 21kb z  lambda DNA. Szybkość elongacji 1 kb / 10-15 sekund zależnie od matrycy. Pozwala oszczędzić czas użytkownikowi przyspieszając PCR reakcje i wykazuje większą wierność niż Taq lub Pfu. Enzym posiada HotStart mechanizm, który inaktywuje enzym w temperaturze pokojowej.  Pozwala to na przygotowanie reakcji w pokojowej temperaturze bez obawy tworzenia się niechcianych produktów.

Cechy:
• Szybka – 4x szybsza niż hot start Taq
• Wysoce tolerancyjna na obecność inhibitorów
• Wysoka wydajność
• Długie PCR produkty

 

Źródło:
E. coli


Zastosowanie:
Hot Start PCR
Rutynowe PCR
Szybka PCR
Wysoko przepustowe PCR
Genotypowanie

 

Bufor reakcyjny: 
5X Reaction Buffer (1ml), 50mM MgCl2 (1ml)

 

Bufor do przechowywania:
20mM Tris-HCl, 100mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 200ug/ml BSA, 50% glicerol, 1X stabilizator, pH 8.0 @ 25 C

 

Warunki przechowywania: 
-20ºC

 

Definicja jednostki:
Jedną jednostkę enzymu definiuje się jako ilość enzymu, niezbędną do przeprowadzenia reakcji inkorporacji 5 nmoli deoksyrybonukleotydów dNTPs do frakcji zaabsorbowanej na nośniku stałym, w czasie15 min w temperaturze 72 °C.

 

Źródło:
Frey, B. and Suppman, B. (1995). BioChemica. 2, 34-35.
Chester, N. and Marshak, D.R. (1993). Analytical Biochemistry. 209, 284-290.

 

Warunki transportu:
suchy lód

 

Protokół:

 

  25 µl Reaction 50 µl Reaction Final Concentration
       
Instructions      
       
  25 µl Reaction 50 µl Reaction Final Concentration
I-5 5X Buffer 5 ul 10 ul 1X (see notes)
10 µM Primer A 1 µl 2 µl 400 µM
10 µM Primer B 1 µl 2 µl 400 µM
Template DNA as needed as needed see notes
50mM MgCl2 as needed as needed see notes
I-5 Enzyme 0.5 - 1 ul 1 - 2 ul  
Water (ddH2O) up to 25 µl up to 50 µl  
       
       
Thermocycling Conditions      
       
3 Step PCR      
Step Temperature Time  
Initial Denaturation 98°C 2 minutes  
Denaturation 98°C 10 seconds 25-35 cycles
Annealing 55°C - 68°C 10-15 seconds  
Extension 72°C 10-15 seconds / kb  
Final Extension 72°C 1-5 minutes  
  4°C Hold  
       
2 Step PCR (see notes)      
Step Temperature Time  
Initial Denaturation 98°C 2 minutes  
Denaturation 98°C 10-15 seconds 25-35 cycles
Combined Annealing & Extension 72°C 15-30 seconds / kb  
Final Extension 72°C 1-5 minutes  
  4°C Hold  
       
Notes      
       
Recommended DNA Template addition      
Genomic DNA 50-250 ng    
Plasmid DNA 1pg-10ng    
Viral DNA 1pg-10ng    
       
Mg2+      
The final concentration of Mg2+ in 1X I-5 PCR Master Mix is 1.5 mM      
Add additional Mg2+ as needed in 0.5 mM increments      
Suggested final Mg2+ concentration ranges from 2 mM to 4 mM      
       
2 Step PCR      
Use 2 Step PCR is recommended when the primer Tm values are >68°C      
       
PCR Product / Cloning      
The 2X I-5 PCR Master Mix results in PCR product with blunt ends      
Blunt-end cloning is recommended after PCR with this product      
For T/A-cloning, the PCR product should be purified before A-addition

Koszyk  

Brak produktów

0,- Kč Razem

Koszyk Realizuj zamówienie