Aktualności

  • 1st Czechoslovak Congress of Medical Genetics 2025

    In the spring, we will participate in the 1st Czechoslovak Congress of Medical Genetics, which will take place from April 2–4, 2025, at the Cultural and Congress Center Elektra in the spa town of Luha...

    Czytaj więcej

  • RANK 2025

    Visit us at the 19th edition of the RANK 2025 conference, which will take place on March 19th and 20th at the Zlatá Štika Hotel in Pardubice. The conference is organized by the Czech Society of Clinic...

    Czytaj więcej

  • Kapras Day 2025

    We would like to invite you to the 23rd Kapras Day on the topic of  "Clinical Genetics," which will take place on Wednesday, February 26, 2025, in the Congress Hall of Hotel Olšanka in Prague. We loo...

    Czytaj więcej
Archiwum aktualności
Strona główna>Produkty>Analiza kwasów nukleinowych>PCR>Polimerazy>I-5™ 2X Hi-Fi PCR Master Mix
https://www.carolinabiosystems.cz/288-thickbox_default/i-5-2x-hi-fi-pcr-master-mix.jpg View full size

I-5™ 2X Hi-Fi PCR Master Mix

Kontakt z nami

Opis:
I-5 Hi-Fi DNA HotStart Polimeraza jest ultra-szybką oraz wysokiej specyficzności DNA polimerazą.  Zapewnia solidną amplifikację z różnych matryc łącznie z plazmidami, BACS, genomowym DNA i lambda DNA. Pozwala na amplifikację do 8kb z ludzkiego genomowego DNA i do 21kb z  lambda DNA. Szybkość elongacji 1 kb / 10-15 sekund zależnie od matrycy. Pozwala oszczędzić czas użytkownikowi przyspieszając PCR reakcje i wykazuje większą wierność niż Taq lub Pfu. Enzym posiada HotStart mechanizm, który inaktywuje enzym w temperaturze pokojowej.  Pozwala to na przygotowanie reakcji w pokojowej temperaturze bez obawy tworzenia się niechcianych produktów.

Cechy:
• Szybka – 4x szybsza niż hot start Taq
• Wysoce tolerancyjna na obecność inhibitorów
• Wysoka wydajność
• Długie PCR produkty

 

Źródło:
E. coli


Zastosowanie:
Hot Start PCR
Rutynowe PCR
Szybka PCR
Wysoko przepustowe PCR
Genotypowanie

 

Bufor reakcyjny: 
5X Reaction Buffer (1ml), 50mM MgCl2 (1ml)

 

Bufor do przechowywania:
20mM Tris-HCl, 100mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 200ug/ml BSA, 50% glicerol, 1X stabilizator, pH 8.0 @ 25 C

 

Warunki przechowywania: 
-20ºC

 

Definicja jednostki:
Jedną jednostkę enzymu definiuje się jako ilość enzymu, niezbędną do przeprowadzenia reakcji inkorporacji 5 nmoli deoksyrybonukleotydów dNTPs do frakcji zaabsorbowanej na nośniku stałym, w czasie15 min w temperaturze 72 °C.

 

Źródło:
Frey, B. and Suppman, B. (1995). BioChemica. 2, 34-35.
Chester, N. and Marshak, D.R. (1993). Analytical Biochemistry. 209, 284-290.

 

Warunki transportu:
suchy lód

 

Protokół:

 

  25 µl Reaction 50 µl Reaction Final Concentration
       
Instructions      
       
  25 µl Reaction 50 µl Reaction Final Concentration
I-5 5X Buffer 5 ul 10 ul 1X (see notes)
10 µM Primer A 1 µl 2 µl 400 µM
10 µM Primer B 1 µl 2 µl 400 µM
Template DNA as needed as needed see notes
50mM MgCl2 as needed as needed see notes
I-5 Enzyme 0.5 - 1 ul 1 - 2 ul  
Water (ddH2O) up to 25 µl up to 50 µl  
       
       
Thermocycling Conditions      
       
3 Step PCR      
Step Temperature Time  
Initial Denaturation 98°C 2 minutes  
Denaturation 98°C 10 seconds 25-35 cycles
Annealing 55°C - 68°C 10-15 seconds  
Extension 72°C 10-15 seconds / kb  
Final Extension 72°C 1-5 minutes  
  4°C Hold  
       
2 Step PCR (see notes)      
Step Temperature Time  
Initial Denaturation 98°C 2 minutes  
Denaturation 98°C 10-15 seconds 25-35 cycles
Combined Annealing & Extension 72°C 15-30 seconds / kb  
Final Extension 72°C 1-5 minutes  
  4°C Hold  
       
Notes      
       
Recommended DNA Template addition      
Genomic DNA 50-250 ng    
Plasmid DNA 1pg-10ng    
Viral DNA 1pg-10ng    
       
Mg2+      
The final concentration of Mg2+ in 1X I-5 PCR Master Mix is 1.5 mM      
Add additional Mg2+ as needed in 0.5 mM increments      
Suggested final Mg2+ concentration ranges from 2 mM to 4 mM      
       
2 Step PCR      
Use 2 Step PCR is recommended when the primer Tm values are >68°C      
       
PCR Product / Cloning      
The 2X I-5 PCR Master Mix results in PCR product with blunt ends      
Blunt-end cloning is recommended after PCR with this product      
For T/A-cloning, the PCR product should be purified before A-addition

Koszyk  

Brak produktów

0,- Kč Razem

Koszyk Realizuj zamówienie