T7 DNA Ligase

Opis: Ligaza DNA T7 katalizuje tworzenie wiązań fosfodiestrowych między grupą fosforanową na końcu 5'-fosforanowym a grupą hydroksylową na końcu 3' w dwuniciowym DNA. Enzym łączy zakończenia sterylnego końca, zakończenia kohezyjne oraz naprawia pojedyncze szczeliny w dwuniciowym DNA.

Zastosowania:

• Łączenie fragmentów Okazaki podczas replikacji
• Komplecikowanie syntezy krótkiego odcinka DNA zachodzącej w procesie naprawy DNA

Źródło: Rekombinowany szczep E. coli zawierający gen ligazy DNA T7

Dostarczony w:

• 20 mM Tris-HCl
• 300 mM NaCl
• 1 mM DTT
• 0,1 mM EDTA
• 50% glicerolu
• pH 7,5 @ 25°C

Bufor do szybkiej ligacji 10x:

• 660 mM Tris-HCl
• 100 mM MgCl2
• 10 mM DTT
• 10 mM ATP
• 75% PEG 6000
• pH 7,6 @ 25°C

Definicja jednostki: Jednostka Weiss to ilość enzymu katalizująca przekształcenie 1 nmola [32PPi] w formę adsorbowalną na Norit w ciągu 20 minut w 37°C. Aktywność enzymu jest oznaczana w następującej mieszaninie: 66 mM Tris-HCl (pH 7,6), 6,6 mM MgCl2, 0,066 mM ATP, 10 mM DTT, 3,3 µM [32PPi].

Jednostka Weiss jest w przybliżeniu równa 67 jednostkom kohezyjnym (CEU). Lub 1000 CEU = 15 jednostek Weiss.

Specyficzna aktywność: 45 jednostek Weiss na µg

Zalecane warunki przechowywania: -20°C

Referencje: Doherty, A. et al. J.Biol. Chem (1996) V.271, No.19, 11083-11089.