Popis
Nitrilotrioctová kyselina (NTA) nabitá nikelnatými, kobaltovými, měďnatými nebo zinečnatými kationty vázaná dlouhými oddalujícími raménky s agarózou CL-6B nabízí vysokou vazebnou kapacitu s minimální nespecifickou vazbou.
Vlastnosti
Četné kombinace ligandů a kovových iontů
Vysoká afinita a velká kapacita
Minimální nespecifická vazba a vynikající čistota
Dlouhá oddalující raménka a minimální sterické překážky
Nízké uvolňování iontů ze sorbentu a jeho vynikající stabilita
Zaručen vysoký výkon i po opakovaném použití
Aplikace
Čištění His-tag proteinů
Výměna stávající NTA nebo IDA agarózy za novou
Čištění za nativních i denaturačních podmínek
Vhodné pro malé proteiny, velké proteinové komplexy a proteiny s nízkou expresí
Purifikace rekombinantních His-značených proteinů
His-značení (His-tag) nebo polyhistidinová značka je řetězec histidinových zbytků na N- nebo C- konci rekombinantního proteinu. Takový řetězec se skládá ze 4 až 10 zbytků, přičemž 6 zbytků je nejběžnějších a nazývají se termínem polyhistidinová kotva. Rekombinantní proteiny mohou mít více než jednu polyhistidinovou kotvu.
V IMAC (Immobilized metal ion affinity chromatography) jsou kovové ionty imobilizovány na pryskyřičné matrici za použití chelatačního činidla, jako je NTA nebo IDA. Ni2+, Co2+, Cu2+ a Zn2+ jsou nejčastěji používanými ionty pro purifikaci rekombinantních proteinů s his značkou, jelikož k ní mají vysokou afinitu a silně se na IMAC kolonu vážou oproti ostatním proteinům, které se váží slabě nebo vůbec. Použitím his značení a metody IMAC lze tedy získat relativně čistý rekombinantní protein přímo ze surového lyzátu.
Jak pro metodu IMAC vybrat různé ligandy a kovové ionty?
NTA a IDA patří mezi dva nejpoužívanější ligandy. NTA je čtyřmocný ligand a je tedy silnější než trojmocný IDA. Obecně NTA poskytuje vyšší vazebnou specificitu a nižší vmíru uvolňování kovových iontů, zatímco IDA vykazuje méně specifickou vazbu a zvýšené uvolňování kovových iontů. IDA může mít vyšší hustotu nasycení kovových iontů a obvykle vyžaduje mnohem nižší koncentraci imidazolu v eluentu.
U kovových iontů v následujícím pořadí Co2+, Zn2+, Ni2+ a Cu2+ se obecně zvyšuje vazebná afinita, zatímco specificita klesá. Cu2+ má nejvyšší afinitu poskytující nejvyšší výtěžnost bílkovin, ale nízkou specificitu. Co2+ má nejnižší afinitu, ale nejvyšší specificitu, což snižuje množství proteinových nečistot v eluátu. Ni2+ je nejpoužívanější, jelikož poskytuje rovnováhu mezi afinitou a specificitou.
Výběr optimální kombinace ligandu a kovového iontu závisí na mnoha faktorech, proto je nejlepším přístupem vyzkoušet různé kombinace a nechat rozhodnout vaše proteiny. Vysoce výkonné pryskyřice a cartridge FastSep™ nabízejí mnoho kombinací pro různé potřeby čištění.
Vysoce účinné pryskyřice a cartridge FastSep™ jsou založeny na zesítěných 6% kuličkách agarosy, které mají speciální strukturální vlastnosti, jež vedou k vynikajícím průtokovým vlastnostem, nízkému protitlaku a struktuře s otevřenými póry. Díky těmto vlastnostem umožňují provoz při velmi vysokém stupni průtoku, což má za následek zvýšenou propustnost a rychlé čištění kolony mezi chromatografickými cykly.
Nabídka
|
Název |
Katalogové číslo |
Popis |
|
Ni-NTA Cartridge |
NINTA-CC1X5 |
5 x 1ml niklem nabitá NTA agaróza v cartridge |
|
Ni-NTA Cartridge |
NINTA-CC5 |
1 x 5ml niklem nabitá NTA agaróza v cartridge |
|
Ni-NTA Cartridge |
NINTA-CC5X5 |
5 x 5ml niklem nabitá NTA agaróza v cartridge |
|
Co-NTA Cartridge |
CONTA-CC1X5 |
5 x 1ml kobaltem nabitá NTA agaróza v cartridge |
|
Co-NTA Cartridge |
CONTA-CC5X5 |
1 x 5ml kobaltem nabitá NTA agaróza v cartridge |
|
Co-NTA Cartridge |
CONTA-CC5X5 |
5 x 5ml kobaltem nabitá NTA agaróza v cartridge |
|
Cu-NTA Cartridge |
CUNTA-CC1X5 |
5 x 1ml mědí nabitá NTA agaróza v cartridge |
|
Cu-NTA Cartridge |
CUNTA-CC5 |
1 x 5ml mědí nabitá NTA agaróza v cartridge |
|
Cu-NTA Cartridge |
CUNTA-CC5X5 |
5 x 5ml mědí nabitá NTA agaróza v cartridge |
|
Zn-NTA Cartridge |
ZNNTA-CC1X5 |
5 x 1ml zinkem nabitá NTA agaróza v cartridge |
|
Zn-NTA Cartridge |
ZNNTA-CC5 |
1 x 5ml zinkem nabitá NTA agaróza v cartridge |
|
Zn-NTA Cartridge |
ZNNTA-CC5X5 |
5 x 5ml zinkem nabitá NTA agaróza v cartridge |
Specifikace
|
Chromatography technique |
Histidine-tagged protein purification |
|
Matrix |
Highly cross-linked 6% beaded agarose |
|
Active group |
Ni2+, Co2+, Cu2+, or Zn2+ charged Nitrilotriacetic Acid (NTA) |
|
Active group density |
>40 umol/ml drained medium |
|
Binding capacity |
>40 mg/ml drained medium |
|
Spacer |
17 atom stable and uncharged ether hydrophilic linkage |
|
Bead geometry & size |
Spherical 50 to 150 um |
|
Bead mean diameter d50v |
90 um |
|
Linear flow velocity |
<75 cm/h at 25 °C, HR 16/10 column, 5 cm bed height |
|
Recommended linear flow rate |
<30 cm/h |
|
Pressure/flow specification |
Base matrix 100-200 cm/h, pressure drop cm H2O/bed height = 15, bed height 10 cm, 5 cm i.d. |
|
1ml Cartridge bed dimensions |
7×25 mm |
|
1ml Cartridge bed height |
25 mm |
|
1ml Cartridge bed volume |
1 ml |
|
1ml Cartridge column I.D |
7 mm |
|
5ml Cartridge bed dimensions |
16×25 mm |
|
5ml Cartridge bed height |
25 mm |
|
5ml Cartridge bed volume |
5 ml |
|
5ml Cartridge column I.D |
16 mm |
|
Maximum cartridge flow rate |
5 ml/min (1 ml cartridge) or 20 ml/min (5ml cartridge) |
|
Recommended cartridge flow rate |
1 ml/min (1 ml cartridge) or 5 ml/min (5 ml cartridge) |
|
Maximum pressure during operation |
5 bar [0.5 MPa] (70 psi) |
|
pH Stability working range |
3 to 13 |
|
pH Stability cleaning in place (cip) |
2 to 14 |
|
Chemical stability |
Stable to commonly used aqueous solutions. Can be used with non-ionic detergents, denaturing solvents, e.g. 8 M urea and 6 M guanidine hydrochloride, Stable in organic solvents, e.g. 50% methylformamide and 50% dioxane. |
|
Storage |
2 to 8 °C |
Iminodioctová kyselina (IDA) nabitá nikelnatými, kobaltovými, měďnatými nebo zinečnatými kationty vázaná dlouhými oddalujícími raménky s agarózou CL-6B nabízí vysokou vazebnou kapacitu s minimální nespecifickou vazbou.
Nitrilotrioctová kyselina (NTA) nabitá nikelnatými, kobaltovými, měďnatými nebo zinečnatými kationty vázaná dlouhými oddalujícími raménky s agarózou CL-6B nabízí vysokou vazebnou kapacitu s minimální nespecifickou vazbou.
Iminodioctová kyselina (IDA) nabitá nikelnatými, kobaltovými, měďnatými nebo zinečnatými kationty vázaná dlouhými oddalujícími raménky s agarózou CL-6B nabízí vysokou vazebnou kapacitu s minimální nespecifickou vazbou.
RNA je během skladování náchylná k degradaci. RNA skladovací pufr od společnosti MCLAB s optimalizovanými činidly a hodnotou pH poskytuje lepší podmínky uchování a tím větší stabilitu RNA než standardní pufr EDTA a TE nebo jen voda.
Nitrilotrioctová kyselina (NTA) nabitá nikelnatými, kobaltovými, měďnatými nebo zinečnatými kationty vázaná dlouhými oddalujícími raménky s agarózou CL-6B nabízí vysokou vazebnou kapacitu s minimální nespecifickou vazbou.
English
Polski
