Pfu DNA Ligase

Popis:

Pfu DNA ligáza je tepelně stabilní enzym, který umožňuje vytvoření fosfodiesterové vazby mezi 5´-fosfátovou a 3´-hydroxylovou skupinou dvou sousedních DNA vláken, která jsou plně spárovaná a zarovnaná s komplementárním DNA vláknem, čímž zajišťuje absenci mezer. Tato ligáza vyžaduje ATP jako kofaktor a vykazuje aktivitu při zvýšených teplotách v rozmezí 45 °C až 70 °C.

Pfu DNA ligáza je vysoce účinná při spojování přerušení (nicků) v DNA během inkubace při vysokých teplotách. Její extrémní termostabilita jí umožňuje odolávat náročným podmínkám PCR procesů. Ačkoli nespojuje krátké 4-bázové přesahy, které jsou běžné při restrikčních enzymových štěpech, je velmi efektivní při spojování 12-bázových přesahů. Tento enzym je izolován z rekombinantního zdroje, což zaručuje jeho čistotu a účinnost pro přesné aplikace v molekulární biologii.

Součástí balení je 10X Pfu DNA ligázový reakční pufr (10 mM Tris-HCl; 600 uM ATP; 2,5 mM DTT; 2,5 mM MgCl2; 0,1% Triton® X-100). 
Enzym je dodán v kocentraci 40 000 jednotek/ml. (Definice jednotky: (Kohezní koncová jednotka) Jedna jednotka je definována jako množství enzymu potřebné k 50% ligaci kohezních konců o 12 párech bází 1 µg λ DNA štěpené BstEII v celkovém reakčním objemu 50 µl na 15 minut při 45 °C. Soudržná koncová jednotka je ekvivalentní jednotce uzavírající zářez.)

Aplikace:

• Pfu DNA ligáza bude ligovat tento substrát:

• Detekce alelově specifických genů pomocí reakce detekce ligázy (Ligase Detection Reaction) a řetězové reakce ligázy (Ligase Chain Reaction).
• Začlenění fosforylovaného oligonukleotidu během amplifikace PCR pro mutagenezi.

Zdroj:
Purifikováno z kmene E. coli, který obsahuje klonovaný gen ligázy.
Reakční podmínky: 

1X Pfu DNA Ligase reakční pufr
Inkubujte při 45 °C

Tepelná inaktivace:

Ne

Skladování: 

-20°C

Velikost balení:

5 000 jednotek (kat. č. PDL-100)

25 000 jednotek (kat. č. PDL-200)