TspDTI

Zdroj: Thermus species DT

5’-A T G A A (N)11–3’
3’-T A C T T (N) 9 -5’

Purifikováno z kmene E. coli, který nese klonovaný gen tspDTRI z Thermus sp. DT.

Reakční teplota: 70 °C

Prototyp: TspDTI

Inaktivační teplota: -

Reakční pufr:

1x TspDTI Buffer: 10 mM Tris-HCl (pH 8.5 při 25°C), 10 mM MgCl2, 1 mM dithiothreitol +enhancers (1).

Definice jednotky: Jedna jednotka je množství enzymu potřebné k úplnému rozštěpení 1 µg lambda DNA za 1 hodinu. Celkový reakční objem je 50 ul.

Vyvarujte se vícenásobných cyklů zmrazování/rozmrazování zásobního reakčního pufru /ne více než 3x/. Rozmrazování by mělo být prováděno při teplotách nepřesahujících 10 °C. Doporučený postup je rozdělit dodaný reakční pufr alikvóty a dlouhodobě uchovávat při –70°C. Teplota –20°C by měla být používána pouze pro krátkodobé skladování.

Poznámky: Před štěpením je nutné DNA purifikovat. Nedoporučujeme používat více než 2 jednotky na 30 μl reakce. Doporučujeme štěpit déle než 1 hodinu. Aby se předešlo posunu DNA během elektroforézy způsobenému silnou interakcí protein-DNA, doporučujeme ukončit reakci přidáním roztoku pro zastavení reakce (obsahujícího denaturační činidlo, tj. 0,2% SDS) s následnou 20 minutovou tepelnou inaktivací při 89 °C.

Podmínky skladování: Skladujte při –20 °C.

Kontrola kvality:

Všechny enzymy jsou testovány na kontaminaci endonukleázou, 3'-exonukleázou, 5'-exonukleázou/5'-fosfatázou a také na nespecifické aktivity jedno- a dvouřetězcové DNázy.

Reference:
1. Skowron, P.M., Majewski, J., Zylicz-Stachula, A., Rutkowska, S.M., Jaworowska, I. and Harasimowicz-Slowinska, R.I. (2003). Nucleic Acids Research31, 14 e 74.