Endonuclease III (Nth)

Popis

Endonukleáza III (Nth) (původem z E. coli) působí jako N-glykosyláza i AP-lyáza. N-glykosylová aktivita uvolňuje poškozené pyrimidiny z dvouvláknové DNA a vytváří AP místo. AP-lyázivá aktivita  enzymu rozštěpí AP místo na 3' konci a zanechává fosfát na 5 konci a cukr s otevřeným řetězcem na 3´ konci. Některé z poškozených bází rozpoznaných a odstraněných Endouklázou III zahrnují močovinu, 5, 6 dihydroxythymin, thymin glykol, 5-hydroxy-5 methylhydanton, uracil glykol, 6-hydroxy-5, 6-dihdrothymin a methyltartronylureu.

Aplikace

Jednobuněčná gelová elektroforéza

Alkalická eluce

Alkalické rozplétání

Zdroj
E-coli

Čistota

Více než 95 % (stanoveno pomocí SDS-PAGE)

Doporučené podmínky skladování
-80 °C, vyhněte se opakovaným cyklům zmrazení a rozmrazení

Definice jednotky
Jedna jednotka je definována jako množství enzymu potřebné k rozštěpení 1 pmol 34 mer oligonukleotidového duplexu obsahujícího jedno AP místo* v celkovém reakčním objemu 10 µl za 1 hodinu při 37 °C v 1X reakčním pufru s endonukleázou III obsahujícím 10 pmol fluorescenčně značeného oligonukleotidového duplexu.

* AP místo se vytvoří ošetřením 10 pmol 34 mer oligonukleotidového duplexu obsahujícího jeden uracilový zbytek s 1 jednotkou Uracil-DNA glykosylázy (UDG) po dobu 2 minut při 37 °C.

Reakční podmínky
1X reakční pufr pro endonukleázu III (Nth)

Inkubujte při 37 ° C

1X reakční pufr pro endonukleázu III (Nth)
20 mM Tris-HCl
1 mM EDTA
1 mM DTT
(pH 8 při 25 ° C)

Koncentrace pro použití
10 000 jednotek/ml

Teplota skladování
-20 ° C

Podmínky skladování
10 mM Tris-HCl, 250 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 200 µg/ml BSA, 50% glycerol, pH 7.4

Inaktivace teplem
65 °C po dobu 20 minut