Endonuclease VIII, E. coli

Popis

Endonukleáza VIII (Nth) (původem z E. coli) působí jako N-glykosyláza i AP-lyáza. N-glykosylová aktivita uvolňuje poškozené pyrimidiny z dvouvláknové DNA a vytváří AP místo. AP-lyázivá aktivita  enzymu rozštěpí AP místo na 3' konci a zanechává fosfát na 5' konci a cukr s otevřeným řetězcem na 3' konci. Některé z poškozených bází rozpoznaných a odstraněných Endouklázou VIII zahrnují močovinu, 5, 6 dihydroxythymin, thymin glykol, 5-hydroxy-5 methylhydanton, uracil glykol, 6-hydroxy-5, 6-dihdrothymin a methyltartronylureu. Endonukleáza VIII je velmi podobná Endonukleáze III, oproti ní má nejen β ale i δ lyázovou aktivitu.

Aplikace

Jednobuněčná gelová elektroforéza

Alkalická eluce

Alkalické rozplétání

Zdroj
E-coli

Čistota

Více než 95 % (stanoveno pomocí SDS-PAGE)

1X Endonuclease VIII reakční pufr
10 mM Tris-HCl, 75 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 8 @ 25°C

Skladovací pufr
10 mM Tris-HCl, 250 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 200mg/ml BSA, pH 8 @ 25°C

Inaktivace teplem
75 °C po dobu 10 minut

Doporučené podmínky skladování
-20 °C, vyhněte se opakovaným cyklům zmrazení a rozmrazení

Definice jednotky
Jedna jednotka je definována jako množství enzymu potřebné k rozštěpení 1 pmol 34 mer oligonukleotidového duplexu obsahujícího jedno AP místo* v celkovém reakčním objemu 10 µl za 1 hodinu při 37 °C v 1X reakčním pufru s endonukleázou VIII obsahujícím 10 pmol fluorescenčně značeného oligonukleotidového duplexu.

* AP místo se vytvoří ošetřením 10 pmol 34 mer oligonukleotidového duplexu obsahujícího jeden uracilový zbytek s 1 jednotkou Uracil-DNA glykosylázy (UDG) po dobu 2 minut při 37 °C.