I-5™ Hi-Fi HotStart DNA Polymerase

I-5 Hi-Fi DNA HotStart Polymerase jest polimerazą DNA o ultra-szybkim działaniu i wysokiej dokładności. Zapewnia wydajną amplifikację trudnych matryc, takich jak plazmidy, BACS, DNA genomowe i DNA lambda. Pozwala na amplifikację do 10 kb ludzkiego DNA genomowego i do 21 kb DNA lambda. Ma prędkość przedłużania wynoszącą 1 kb / 10-15 sekund, w zależności od rodzaju matrycy. Pozwala to użytkownikom zaoszczędzić czas, przyspieszając reakcje PCR, oraz zapewnia wyższą dokładność niż Taq czy Pfu. Enzym zawiera mechanizm HotStart, który dezaktywuje enzym do momentu podgrzania. Pozwala to na przygotowanie reakcji PCR w temperaturze pokojowej, eliminując obawy związane z dimery primerów lub nieswoistą preamplifikacją.

Cechy:

• Szybka – 1 kb / 10-15 sekund
• Wysoka dokładność – 1 błąd na 110 538 nt
• Solidna – tolerancja na inhibitory
• Wysokie wydajności – wysoka efektywność
• PCR długiego zakresu – około 10 kb ludzkiego DNA genomowego

Źródło: E. coli

Zastosowania:

• Hot Start PCR
• Rutynowe PCR
• Szybkie PCR
• PCR wysokoprzepustowe
• Genotypowanie

Dostarczony z:

• 5X Buforem Reakcyjnym (1 ml, 5X MgCl2 dołączone)
• 50 mM MgCl2 (1 ml) (do optymalizacji)

Dostarczony w (opis bufora): 20 mM Tris-HCl, 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, 200 µg/ml BSA, 50% glicerolu, 1X stabilizator, pH 8.0 @ 25°C

Warunki przechowywania: -20ºC

Definicja Jednostki: Jednostka to ilość enzymu, która w ciągu 15 minut przy 72°C wbudowuje 5 nmol dNTP do nierozpuszczalnego w kwasie materiału.

Dane eksperymentalne:

Porównanie polimeraz DNA o wysokiej dokładności: I5 (MCLAB), KAPA (Roche) i Q5 (NEB)

Dokładność polimerazy DNA oceniana jest przez współczynnik błędów, tj. procent substytucji zasad na cykl PCR (przy efektywności replikacji 2.0). Współczynniki błędów polimerazy DNA I5 (MCLAB), KAPA (Roche) i Q5 (NEB) zostały zmierzone zarówno za pomocą sekwencjonowania Sangera, jak i sekwencjonowania nowej generacji (Illumina_MiSeq) (Tabela 1).

Wnioski:

Dokładność polimerazy DNA I5 firmy MCLAB jest ultra-wysoka, z przeciętnie 1.25 błędu na 100,000 par zasad zarówno według sekwencjonowania Sangera, jak i NGS_Illumina, co jest przynajmniej równoważne dokładności KAPA lub Q5.

Metody:

W tym teście I5 zostało przebadane pod kątem swojej dokładności w porównaniu z polimerazami DNA KAPA i Q5. Matrycą o długości 2000 pb było amplifikowane PCR z użyciem I5, KAPA lub Q5 przez 35 cykli. Wskaźniki błędów PCR zostały ustalone za pomocą sekwencjonowania Sangera (Rysunek 1) i NGS_Illumina (Rysunek 2). Dane surowe zostały znormalizowane za pomocą równania:

e=n(f⋅2)

gdzie $f$ to procent błędów zmierzonych po PCR, a $n$ to liczba rzeczywistych cykli PCR.

Rysunek 1. Ocena dokładności polimerazy PCR za pomocą sekwencjonowania Sangera.

Rysunek 2. Ocena dokładności polimerazy PCR za pomocą sekwencjonowania nowej generacji (Illumina_MiSeq).

Referencje: Frey, B. and Suppman, B. (1995). BioChemica. 2, 34-35. Chester, N. and Marshak, D.R. (1993). Analytical Biochemistry. 209, 284-290.

Warunki wysyłki: suchy lód

Protokół