Blunt/TA Ligation Master Mix

Popis:

Blunt/TA Ligation Master Mix je hotový 2X master mix navržený pro efektivní ligaci obtížných DNA fragmentů – jak s tupými, tak s 1-bazovými převisy. Obsahuje T4 DNA ligázu a optimalizované složky, které výrazně zvyšují účinnost a rychlost ligace i u náročných templátů.

Blunt/TA Ligation Master Mix dokáže ligovat následující fragmenty DNA:

Na obrázku lze vidět výsledek ligace s jednobázovými přesahy pomocí Blunt/TA Ligation Master Mix při různých časech reakce při 20 °C (vlevo) nebo při různých teplotách po dobu 15 minut (vpravo). Počet transformantů získaných z trojitého naočkování ukazuje, že Master Mix funguje velmi dobře při pokojové teplotě (20 °C–25 °C) již za 15 minut.

Graf znázorňuje srovnání T4 DNA ligázy (vysoká koncentrace), Rapid Ligation Master Mixu (kat. č. 40102) a Blunt/TA Ligation Master Mixu (kat. č. 40101) pro ligaci substrátů s nikem, kohezními konci, 3´ převisem o jednom nukleotidu a 5´ převisem o jednom nukleotidu. Všechny ligace byly inkubovány po dobu 15 minut, s výjimkou 5´ převisu o jednom nukleotidu, který byl inkubován 1 hodinu. Blunt/TA Ligation Master Mix dosahuje nejvyšší účinnosti nejen u nicků a lepkavých konců (až 90 %), ale také výrazně lepších výsledků u fragmentů s 3′ a 5′ jednobázovým převisem oproti běžné T4 ligáze.

Vlastnosti: 

• Jednoduché nastavení reakce – stačí smíchat fragmenty DNA s 2X master mixem
• Rychlé výsledky – vysoká účinnost ligace již za 15 minut při pokojové teplotě (20–25 °C)
• Úspora vzorku – ideální pro klonování i ze vzácných nebo omezených DNA
• Malý objem reakce – efektivní pro přípravu více klonů či paralelní transformace různých kmenů
• Zjednodušený transformační protokol – šetří čas a práci v laboratoři