Benzonázovou endonukleázu (původ Serratia marcescens) lze použít k degradaci všech forem DNA a RNA (jednovláknové, dvouvláknové, lineární i cirkulární). Tento enzym tvoří dimer s dvěma dusilfidickými vazbami o molekulové hmotnosti 30 kD nemá proteolytickou aktivitu.
Popis
Benzonázovou endonukleázu (původ Serratia marcescens) lze použít k degradaci všech forem DNA a RNA (jednovláknové, dvouvláknové, lineární i cirkulární). Tento enzym tvořící dimer s dvěma dusilfidickými vazbami o molekulové hmotnosti 30 kD nemá proteolytickou aktivitu. Optimální pH pro aktivitu enzymu je 8.0-9.2. Nukleové kyseliny kompletně štěpí za vzniku 3-5 bp dlouhých nukleotidů zakončených 5'-monofosfátem, což je ideální pro odstranění nukleových kyselin z rekombinantních proteinů a pro další aplikace, kde je třeba nukleové kyseliny úplně rozštěpit. Tnto enzym také snížuje viskozitu v proteinových extraktech a zabraňuje shlukování buněk. Předběžná úprava vzorku proteinu zlepšuje jeho rozlišení na 2D gelové elektroforéze díky odstranění navázaných nukleových kyselin.
Funkce
Snadná manipulace, úspora času
Cenově výhodnější
Žádná typická proteázová aktivita
Stabilní kvalita produktu
Vysoká čistota, nízké znečištění
Použitelné při čištění více než 2 000 proteinů
Vhodné pro purifikaci rekombinantní protilátky
Vhodné pro purifikaci vakcín
Aplikace
Štěpí nativní nebo tepelně denaturovanou DNA a RNA.
Příprava bílkovin v mikrokalometrických experimentech.
Snížení shlukování buněk během přípravy směsí chimérických buněk.
Příprava jaderných extraktů štěpením DNA a uvolňováním jaderných proteinů úzce spojených s DNA.
Odstranění nukleové kyseliny ze vzorků proteinů.
Definice jednotky
Jedna jednotka štěpí sonikovanou DNA lososích spermií na kyselinou rozpustné oligonukleotidy ekvivalentní AA260 1.0 za 30 minut při pH 8.0 při 37 °C (reakční objem 2.625 ml).
Čistota
Více než 95% (stanoveno metodou SDS-PAGE)
Podmínky skladování
50% glycerol, 20 mM Tris HCl - pH 8.0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl
původ: E. coli nesoucí gen Tn5
náhodná inserce transpozonu do DNA
vyžaduje 19-bp ME sekvenci
využití gDNA
původ Pyrococcus furiosus
čistota > 95 %
Adaptivní imunitní systém nalezený u prokaryot využívá CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) a proteiny s ním asociované (Cas) ke štěpení cizího genetického materiálu. Cas13d (také CasRx) pocházející z Ruminococcus flavefaciens XPD3002, je vysoce aktivní a krátká (94 kB).
Rychlá a jednoduchá fragmentace
Velikost fragmentů snadno řiditelná délkou inkubace
Ideální pro přípravu NGS knihoven
Adaptivní imunitní systém nalezený u prokaryot využívá CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) a proteiny s ním asociované (Cas) ke štěpení cizího genetického materiálu. Cas13d (také CasRx) pocházející z Ruminococcus flavefaciens XPD3002, je vysoce aktivní a krátká (94 kB).
Nukleáza Cas9 naváděná RNA sekvencí katalyzuje štěpení dvouvláknové DNA na cílovém místě.
Rychlá a jednoduchá fragmentace
Velikost fragmentů snadno řiditelná délkou inkubace
Ideální pro přípravu NGS knihoven
Systémy CRISPR-Cas jsou výkonné nástroje pro úpravu nukleových kyselin. Nukleáza Cas12a (také označovaná jako Cpf1), patřící do systému CRISPR druhé třídy typu V je kompaktní a účinný enzym, který štěpí cílovou dvouvláknovou DNA za vzniku fragmentů s lepivými konci.
Adaptivní imunitní systém nalezený u prokaryot využívá CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) a proteiny s ním asociované (Cas) ke štěpení cizího genetického materiálu. Cas13a (dříve C2c2) je součástí systému typu VI CRISPR-Cas.
Rychlá a jednoduchá fragmentace
Velikost fragmentů snadno řiditelná délkou inkubace
Ideální pro přípravu NGS knihoven
Benzonázovou endonukleázu (původ Serratia marcescens) lze použít k degradaci všech forem DNA a RNA (jednovláknové, dvouvláknové, lineární i cirkulární). Tento enzym tvoří dimer s dvěma dusilfidickými vazbami o molekulové hmotnosti 30 kD nemá proteolytickou aktivitu.
English
Polski
