Čeština
English
ATP Sulfurylase Yeast
Adenozyno-5'-trifosforan sulfurylaza jest oczyszczana z E. coli zawierającej gen sulfurylazy adenozyno-5'-trifosforanu z drożdżami.
Koszyk
RCA DNA Amplification Kit
Kit do amplifikacji DNA RCA to nowatorski produkt opracowany specjalnie do przygotowywania matryc do sekwencjonowania DNA. Metoda RCA wykorzystuje polimerazę DNA bakteriofaga phi29 do eksponencjalnej amplifikacji jedno- lub dwuniciowych krążkowych matryc DNA poprzez amplifikację koła obrotowego (RCA).
Kit do amplifikacji DNA RCA to nowatorski produkt opracowany specjalnie do przygotowywania matryc do sekwencjonowania DNA. Jak przedstawiono na Rysunku 1, metoda RCA wykorzystuje polimerazę DNA bakteriofaga phi29 do eksponencjalnej amplifikacji jedno- lub dwuniciowych krążkowych matryc DNA poprzez amplifikację koła obrotowego (RCA) (1, 2). Ta izotermalna metoda amplifikacji umożliwia uzyskanie mikrogramowych ilości DNA z pikogramowych ilości materiału wyjściowego w ciągu kilku godzin.
Amplifikacja in vitro bardzo małych ilości matrycy DNA eliminuje konieczność nocnej hodowli komórkowej i konwencjonalnej puryfikacji plazmidu lub DNA M13. Aktywność korekcyjna polimerazy DNA phi29 zapewnia replikację DNA o wysokiej dokładności (3).
Materiałem wyjściowym do amplifikacji może być niewielka ilość komórek bakteryjnych zawierających plazmid, izolowany plazmid, nietknięty bakteriofag M13 lub dowolny okrężny próbka DNA. Kolonie bakteryjne można zbierać z płyt agarowych i dodawać bezpośrednio do reakcji RCA. Alternatywnie, mikrolitrowe ilości nasyconej kultury bakteryjnej lub zasobu glicerolowego mogą służyć jako materiał wyjściowy. W zależności od źródła materiału wyjściowego, amplifikacja jest ukończona w czasie od 4 do 18 godzin w temperaturze 30°C, bez konieczności cyklowania termicznego. Produkt reakcji RCA to wysokocząsteczkowe, dwuniciowe konkatenemery okrężnej matrycy.
Zauważ, że w przypadku korzystania z klonów M13, produkt RCA to dwuniciowe DNA i można go sekwencjonować za pomocą starterów do sekwencji zarówno w kierunku do przodu, jak i do tyłu. DNA amplifikowane metodą RCA może być używane bezpośrednio w reakcjach sekwencjonowania cyklicznego bez konieczności jakiejkolwiek puryfikacji.
Rysunek 1, Schematyczny diagram procesu RCA. Losowe heksamery przyłączają się do okrężnej matrycy DNA w wielu miejscach. Polimeraza DNA phi29 przedłuża każdy z tych primerów. Gdy polimeraza DNA dociera do primeru przedłużonego w dół strumienia, zachodzi synteza z przemieszczaniem nici. Wypchnięta nić staje się jednoniciowa i gotowa do przyłączenia kolejnego heksamerycznego primeru. Proces ten kontynuuje się, prowadząc do eksponencjalnej, izotermalnej amplifikacji.
Figure 2.
Kit do Amplifikacji DNA RCA (100 reakcji) Nr kat.: PPK-100
- Polimeraza DNA Phi29, 20 µl, (10 000 jednostek/ml)
- Mieszanka MCRCA 2x, 1 ml
- Bufor do lizy komórkowej, 1 ml
Kit do Amplifikacji DNA RCA (500 reakcji) Nr kat.: PPK-200
- Polimeraza DNA Phi29, 100 µl, (10 000 jednostek/ml)
- Mieszanka MCRCA 2x, 5 ml
- Bufor do lizy komórkowej, 5 ml
Referencje:
- Dean, F. et al., Genome Research 11, 1095–1099 (2001).
- Lizardi, P. et al., Nat. Genet. 19, 225–232 (1998).
- Estaban, J. A. et al., J. Biol. Chem. 268, 2719–2726 (1993).
PPK-100
Nowy
Komentarze (0)
Na razie nie dodano żadnej recenzji.
16 innych produktów w tej samej kategorii:
QuantumScript™ HD Reverse Transcriptase
QuantumScriptTM HD Reverse Transcriptase to wersja o zwiększonej termostabilności i zmniejszonej aktywności RNazy H. Może być używana do syntezy pierwszego łańcucha cDNA poprzez odwrotną transkrypcję (RT) w wyższych temperaturach niż inne rodzaje odwrotnych transkryptaz wirusa białaczki mysiej Moloney (M-MuLV), co umożliwia uzyskiwanie większych ilości cDNA w trudnych reakcjach transkrypcji RNA.
RNAse Inhibitor
Inhibitor RNazowy to kwasowe białko o masie 52 kDa, które jest silnym inhibitorem niekonkurencyjnym rybonukleaz typu trzustkowego, takich jak RNaza A, RNaza B i RNaza C.
QuantumScript™ Reverse Transcriptase
Universal Reverse Transcriptase jest mutacją odwrotnej transkryptazy M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus) z zredukowaną aktywnością RNazy H i zwiększoną termostabilnością.
DNA Fragmentation Enzyme
Fast and simple fragmentation
Fragment size easily controlled by incubation time
Ideal for NGS library preparation
T7 DNA Ligase
T7 DNA Ligase katalizuje tworzenie wiązań fosfodiestrowych między grupą fosforanową na końcu 5' a grupą hydroksylową na końcu 3' w dwuniciowym DNA. Enzym łączy zakończenia sterylnego końca, zakończenia kohezyjne oraz naprawia pojedyncze szczeliny w jednoniciowym DNA.
SmartRT™ Reverse Transcriptase Kit
SmartRTTM Reverse Transcriptase to zmodyfikowana odwrotna transkryptaza MMLV, która poprawia termostabilność enzymu, redukuje aktywność RNazy H oraz zdolność syntezy cDNA. Enzym wykazuje także aktywność transferazy końcowej, dodając kilka dodatkowych nukleotydów na koniec zsyntetyzowanego cDNA.
Uracil DNA Glycosylase (UDG)
Uracyl-DNA glikozydaza katalizuje hydrolizę wiązania N-glikozydycznego pomiędzy uracylem a cukrem, pozostawiając miejsce apurynowe w jedno- lub dwuniciowym DNA zawierającym uracyl. Enzym nie wykazuje mierzalnej aktywności wobec krótkich oligonukleotydów (<6 zasad) ani substratów RNA.
DNA Fragmentation & A-tailing Enzyme Mix
Fast and simple fragmentation
Fragment size easily controlled by incubation time
Ideal for NGS library preparation
DNA Fragmentation & Blunting Enzyme Mix
Fast and simple fragmentation
Fragment size easily controlled by incubation time
Ideal for NGS library preparation
T4 DNA Ligase
Ligaza DNA T4 katalizuje tworzenie wiązania fosfodiestrowego między sąsiadującymi końcami 5'-fosforanowym i 3'-hydroksylowym w dwuniciowym DNA lub RNA, używając ATP jako kofaktora.
I-5™ Hi-Fi HotStart DNA Polymerase
I-5 Hi-Fi DNA HotStart Polymerase to polimeraza DNA o wysokiej dokładności i szybkości działania, aktywowana termicznie (HotStart).
T4 DNA Polymerase
T4 DNA Polymerase katalizuje przedłużanie zlokalizowanej na matrycy DNA sekwencji starterowej w kierunku 5'→3'. Ten enzym wykazuje silną aktywność egzonukleazy w kierunku 3'→5'; nie posiada natomiast żadnej wrodzonej aktywności egzonukleazy w kierunku 5'→3' ani funkcji przemieszczania się wzdłuż łańcucha.
Kit do amplifikacji DNA RCA to nowatorski produkt opracowany specjalnie do przygotowywania matryc do sekwencjonowania DNA. Metoda RCA wykorzystuje polimerazę DNA bakteriofaga phi29 do eksponencjalnej amplifikacji jedno- lub dwuniciowych krążkowych matryc DNA poprzez amplifikację koła obrotowego (RCA).